产品货号:
XH005
中文名称:
植物线粒体提取试剂盒
英文名称:
Plant Mitochondrion Extraction Kit
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒可用于从植物叶片组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于田间采摘或者实验室培养的植物叶片中线粒体的制备。其制备物,可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。但不适用于进一步DNA提取。
组分 | 50T | 100T |
Lysis Buffer | 100mL | 200mL |
β-巯基乙醇 | 1mL | 1mL×2 |
Mito-Wash Buffer | 25mL | 50mL |
Store Buffer | 5mL | 10mL |
保存:-20℃,有效期1年,频繁使用时可置于4℃保存三个月。
- 以离心力g计算正确的离心速度,不同的离心机可据此精确计算离心速度。
- 进行Western Blot和2D-胶电泳,可直接在第7步的沉淀中加入上样缓冲液裂解线粒体。
- β-巯基乙醇有毒,请注意通风及防护。
- 样本采集前处理:无论田间自然生长还是实验室组织培养,采摘前须避光生长24~48小时,以减少叶片组织中糖类及叶绿体含量。取适量Lysis Buffer,加入0.5% β-巯基乙醇,10mL Lysis Buffer加入50μLβ-巯基乙醇,混匀,形成Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液,此溶液可2-8度保存一个月。
- 叶片用蒸馏水清洗2~3次,滤纸吸干,有条件请用液氮研磨叶片1-2克,研磨完后,取800mg左右研磨的叶片粉,加入1.5mL预冷的Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液,混匀。如果无条件(无液氮),请预冷研钵,取洗过的叶片1000mg,用剪刀剪为碎块放入玻璃匀浆器或者研钵中。加入1.5mL预冷的Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液,冰上研磨至看不见明显组织块;
- 将研磨物放置合适的离心管,4℃,1000×g离心5min;
- 将上清转移到一新的离心管中,在沉淀中加入0.5mL Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液,混匀,再次4℃,1000×g离心5min,取上清;合并两次上清,将上清4℃ 1000×g再次离心5min。
- 取上清,加入一新的离心管中,4℃,16000×g离心10min。离心后的上清含胞浆成分,可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管,线粒体沉淀在管底。
- 在线粒体沉淀中加入0.5mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀,4℃,1000×g离心5min;
- 取上清,加入一新的离心管中,4℃,16000×g离心10min。弃上清,高纯度的线粒体沉淀在管底;
- 用50~100μL Store Buffer或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀,立即使用或-70℃保存。
一般低温离心机都有离心力显示,如果没有,可以用以下公式简单的换算。
G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2
G为离心力,一般以g(重力加速度)的倍数来表示;
[rpm]2:转速的平方;
R为半径,单位为厘米。
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